一、實(shí)驗介紹
常規轉染技術(shù)可分為兩大類(lèi),一類(lèi)是瞬時(shí)轉染,一類(lèi)是穩定轉染(永久性轉染),前者外源DNARNA不整合到宿主染色體中,雖然可以達到高水平表達,但通常只能維持幾天,在轉染後的24-72小時(shí)內分析結果,後者外源質(zhì)粒DNA整合到宿主細胞染色體上,使宿主細胞可長(cháng)期表達目的基因及蛋白,需要在瞬時(shí)轉染基礎上對靶細胞性行篩選,篩選得到的細胞可穩定表達目的蛋白,用於蛋白的擴增及富集,或得到穩定沉默特定基因的細胞株
二、實(shí)驗週期
5-7 工作日(瞬時(shí)轉染) 50-60 工作日(穩定轉染)
三、交付標準
細胞、實(shí)驗結果報告(材料、方法、數據分析、實(shí)驗結果)
四、客戶(hù)提供
瞬時(shí)轉染客戶(hù)提供:待轉染細胞株及細胞培養相關(guān)信息、待轉染的質(zhì)粒、目的基因信息、目的蛋白抗體
常規細胞或特殊細胞穩定轉染(質(zhì)粒轉染)客戶(hù)提供:待轉染細胞株、待轉染質(zhì)粒(包括質(zhì)粒測序結果)、目的基因信息、目的蛋白抗體
五、實(shí)驗流程
順時(shí)轉染:調整細胞狀態(tài) 細胞轉染 24、48、72hr檢測目的基因的表達
穩定轉染:調整細胞狀態(tài) 細胞轉染 抗生素篩選 混合穩轉株獲得 穩轉細胞株鑑定
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