2X 探針?lè )╭PCR Mix （TaqMan熒光定量PCR試劑盒）是基于熒光探針檢測的即用型 PCR 試劑盒，可以對靶片段進(jìn)行實(shí)時(shí)定量 PCR 分析（quantitative PCR、qPCR）。

產(chǎn)品含有經(jīng)過(guò)優(yōu)化的緩沖液組分、熱啟動(dòng) Taq DNA 聚合酶、Taq DNA 穩定劑、dNTPs、MgCl2和穩定劑等所有實(shí)時(shí)定量 PCR 所需要的成分

熒光定量PCR（qPCR）是大家常用的分子生物學(xué)技術(shù)，根據實(shí)驗方法的不同

qPCR可以分為染料法（SYBR Green法為代表）和探針?lè )ǎ═aqman法為代表）

因為操作簡(jiǎn)單，價(jià)格便宜，SYBR Green法qPCR 受到了更為普遍的使用。

但是SYBR Green法并非萬(wàn)能的，在很多時(shí)候SYBR Green無(wú)法滿(mǎn)足實(shí)驗的需要

Taqman qPCR特異性強，信噪比高，能夠適用于多重qPCR，數據更具說(shuō)服力

Taqman法qPCR的原理:

Taqman是一段短的單鏈DNA探針，能夠和模板DNA進(jìn)行退火。Taqman探針的5’端帶有一個(gè)報告基團（R），3’端帶有一個(gè)猝滅基團（Q）。報告基團所發(fā)出的熒光會(huì )被猝滅基團所吸收，因此正常情況下熒光探針是不會(huì )發(fā)出熒光的。在PCR的延伸過(guò)程中，DNA聚合酶沿著(zhù)模板鏈從5’到3’的方向合成新鏈，當DNA聚合酶到達Taqman探針結合位點(diǎn)時(shí)，DNA聚合酶的5’-3’外切酶活性會(huì )將Taqman探針進(jìn)行水解，導致Taqman探針的報告基團脫離了猝滅基團，從而發(fā)出熒光?？梢愿鶕晒庵档母叩?，判斷PCR過(guò)程中目的片段產(chǎn)生的多少，從而實(shí)現對目的基因進(jìn)行實(shí)時(shí)定量。

在Taqman qPCR中，上下游引物只有擴增探針所結合的片段時(shí)，才會(huì )產(chǎn)生熒光，非特異擴增是不會(huì )產(chǎn)生熒光的，因此Taqman qPCR的特異性非常好。另外，可以用不同的報告基團，標記多個(gè)熒光探針，實(shí)現在一管PCR體系中，同時(shí)對多個(gè)基因進(jìn)行定量，這樣不僅實(shí)驗的通量大大提高，而且實(shí)驗的一致性也更好。

什么時(shí)候需要使用探針?lè )╭PCR:

相對于SYBR Green qPCR，探針?lè )╭PCR需要設計和合成特異的熒光探針，增加了設計難度和實(shí)驗成本。但是，當你遇到如下情況時(shí)，Taqman qPCR是你的第一選擇。

>>>1.基因檢測

以Taqman為代表的探針?lè )╭PCR最常用的應用場(chǎng)景就是基因檢測，包括醫療診斷，環(huán)境微生物檢測，轉基因檢測等。這些應用場(chǎng)景對結果的特異性要求非常高，而染料法qPCR的結果很容易受到非特異性擴增的干擾，因此一般都是使用Taqman qPCR進(jìn)行檢測。

>>>>2.很難設計特異性引物

qPCR對引物的擴增效率要求很高，如果用相對定量法（Livak法）進(jìn)行數據分析，需要保證引物的擴增效率在90%到105%之間，否則最后得到的數據不真實(shí)。然而有時(shí)候，為了保證擴增的特異性，只能在某個(gè)特異位點(diǎn)設計引物，從而犧牲了一些其它的引物設計原則，比如GC含量過(guò)高，引物有二級結構等，導致qPCR擴增的效率過(guò)低。這種情況下用Taqman qPCR可以很好的解決這一點(diǎn)，因為T(mén)aqman 探針本身就可以保證特異性，因此設計引物的時(shí)候有更多靈活性，更容易設計擴增效率高的引物對。

>>>>3.發(fā)表高水平文章

由于Taqman法比SYBR Green法具有更好的特異性，實(shí)驗結果更接近真實(shí)，所以很多高水平文章更青睞于Taqman qPCR的結果。特別是一些關(guān)鍵基因的關(guān)鍵結果，如果有Taqman qPCR的數據，會(huì )給你的文章加分不少。