ReadyBlot? Fast Western Transfer Buffer 10X(快速轉印緩沖液)
產(chǎn)品名稱(chēng):ReadyBlot™ Fast Western Transfer Buffer 10×
中文別名:快速轉印緩沖液
產(chǎn)品編碼:ZL001RB-1000ml
MDBio自主研發(fā)產(chǎn)品
本品為預先制配好的快速轉印緩沖液,含散熱因子配方
可承受400mA電流在30分鐘即完成蛋白轉印過(guò)程
(視轉印目的蛋白分子量的大小來(lái)調整轉印時(shí)間長(cháng)短)
常溫條件下轉印,無(wú)須在冰浴條件下進(jìn)行
可兼容適用于其他品牌制成的PAGE膠或電泳后的PAGE膠
搭配QuickRun能達到更好條帶效果
適用于不同品牌轉印設備,無(wú)須替換設備
未開(kāi)封常溫條件下保存五年
產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn):
本配方緩沖液可以大大加快轉印的速度,并且在轉印過(guò)程中,不會(huì )產(chǎn)生大量熱量,
不會(huì )導致蛋白變異或降解,不會(huì )破壞蛋白本身的完整性。
•快速: 相較傳統方式的90分鐘-4小時(shí),此緩沖液可以將轉印時(shí)間縮短到< 50分鐘。
•兼容性: 可使用現有設備,適用所有的蛋白膠,濕轉系統以及膜類(lèi)型。
•轉印效率高: 100% 轉移6-240kD蛋白。
•工作液可重復使用3-5次。
注意:
1.具體轉印時(shí)間需針對蛋白大小略微調整;不同廠(chǎng)家電源供應器的電阻所造成電壓和電流失衡
需留意,我們所建議條件是400mA電流對應約為80-110V電壓。
2.緩沖液可以反復利用,但每次使用的轉印時(shí)間會(huì )改變緩沖液的離子濃度和PH值,因此重復使用
次數可觀(guān)察緩沖液的澄清度及黏稠度;
3.反復利用的緩沖液須冷藏保存,以避免長(cháng)菌;
4.不同蛋白大小所需轉印時(shí)間不同,一般50KDa大小以?xún)鹊哪康牡鞍准s30分鐘,50KDa-120KDa的
目的蛋白需要多加5-10分鐘, 120KDa-180KDa的目的蛋白可再加5-10分鐘
(以上僅供參考建議,實(shí)際要考慮目的蛋白在總蛋白中的含量濃度占比)
用于蛋白轉印實(shí)驗(將蛋白從膠上轉移到PVDF膜上)
在WB過(guò)程中從SDS-PAGE膠上轉移蛋白至膜上是非常關(guān)鍵的步驟
優(yōu)化轉移時(shí)間往往需要實(shí)驗多次,如何保證蛋白完全轉移技巧:
1.使用預染的marker:
預染marker能夠直觀(guān)的觀(guān)察到跑膠情況,而且在轉移過(guò)程中也是很好的工具,
在完成印跡后觀(guān)察膜上的 marker 看是否所有條帶都已經(jīng)轉移至膜上。
2.在轉印裝置中加兩塊膜:
小分子量的蛋白轉移的比較快,為保證大分子蛋白的轉印,長(cháng)時(shí)間的轉印可能使小分子蛋白透過(guò)膜,
可以加入兩塊膜,如果能在第二塊膜上檢測到小分子蛋白,說(shuō)明轉印時(shí)間過(guò)長(cháng)。
3.在轉印后對膠染色:
如果轉印時(shí)間不夠優(yōu)化,通過(guò)對膠染色,在膠上能夠觀(guān)察到未轉移完全的蛋白,
這種情況在轉印大分子蛋白是常見(jiàn),使用銀染或者考馬斯亮藍的方法都可以。
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