ReScript^TMII Reverse Transcriptase是在M-MLV (RNase H-) Reverse Transcriptase基礎上通過(guò)分子進(jìn)化技術(shù)多點(diǎn)突變的新一代反轉錄酶，大幅度提高了穩定性和反轉錄效率。Rescript^TMII RT SuperMix for qPCR(+gDNA Eraser)適用于兩步法qRT-PCR檢測。試劑盒中的4×gDNA Eraser Mix可去除RNA模板中殘留的基因組DNA，保證后續定量結果的準確性。5×ReScript^TMII RT SuperMix II中含有反轉錄第一鏈合成所需的所有組分（Buffer，dNTP Mixture，ReScript^TMII Reverse Transcriptase，RNase Inhibitor，Random 6 mers/Oligo (dT)Primer Mix），加入模板RNA和水即可迅速進(jìn)行反應，同時(shí)終止gDNA Eraser作用，保證cDNA的完整性。

本試劑盒針對qPCR進(jìn)行Random 6 mers/Oligo (dT)Primer的比例優(yōu)化，使cDNA合成可從RNA轉錄本的各個(gè)區域起始，并具有相同的反轉錄效率，最大程度保證了qPCR結果的真實(shí)性和可重復性。反轉錄產(chǎn)物兼容SYBR Green和探針?lè )?/span>qPCR，可以根據實(shí)驗目的，選擇相應的試劑配合使用，進(jìn)行高性能的基因表達分析。

 

 

注意事項 

 

1. 高質(zhì)量的完整的RNA對于獲得高質(zhì)量的cDNA是至關(guān)重要的。實(shí)驗前請用電泳驗證RNA的完整性。 

2. 建議RNA是溶于水而不是TE中，因為TE中的EDTA會(huì )對反轉錄反應產(chǎn)生抑制。 

3. 20 µl反轉錄反應體系中，建議Total RNA加入不超過(guò)2 μg，mRNA不超過(guò)200 ng，否則加入RNA量過(guò)高，可能會(huì )超出后續qPCR的線(xiàn)性范圍。 

4. 4×gDNA Eraser Mix、5×ReScript^TMII RT SuperMix II和5×No RTase Control Mix含有高濃度的甘油，粘度高，在使用前請短暫離心收集到離心管底部，并用移液槍輕輕吸打充分混勻后，準確吸取，并且不要使Tip插入液面過(guò)深，否則會(huì )因Tip壁粘著(zhù)造成損失。 

5. 可以不經(jīng)過(guò)基因組去除步驟，直接用5×ReScript^TMII RT SuperMix II進(jìn)行反轉錄，這樣所得到的結果會(huì )與使用ReScript^TMII RT SuperMix for qPCR相當。但是請勿將gDNA Eraser與其他試劑盒中的5×ReScript^TMII RT SuperMix配套使用，因其不含終止gDNA Eraser反應的成分，會(huì )影響反轉錄和后續的qPCR實(shí)驗。 

6. cDNA產(chǎn)物僅適用于qPCR反應，如果下游實(shí)驗進(jìn)行基因克隆等長(cháng)片段PCR擴增，可使用Rescript^TMII 1st Strand cDNA Synthesis Kit進(jìn)行操作。

組成及包裝量

   

組分	100 rxn (20 μl/rxn)
4× gDNA Eraser Mix	400 μl
5× ReScriptTM II RT SuperMix II	400 μl
5× No RTase Control Mix*	40 μl
RNase free H2O	2 × 1 ml

 

     

 

第一鏈cDNA合成?？捎糜诟呖截?、低拷貝基因的qPCR分析。