Bradford試劑蛋白定量是一種快速、即用型的總蛋白光學(xué)定量方法。在酸性條件下，考馬斯亮藍G-250染料與蛋白質(zhì)疏水區結合，導致最大吸收峰由465 nm變?yōu)?95 nm，同時(shí)顏色也由棕色變?yōu)樗{色，該藍色化合物顏色的深淺與蛋白質(zhì)濃度的高低成正比關(guān)系。將蛋白質(zhì)樣品或稀釋的BSA與Bradford試劑混合，測量在595 nm處的吸收值，在由一系列稀釋的BSA建立的標準曲線(xiàn)的情況下，蛋白質(zhì)的濃度可以根據標準曲線(xiàn)而確定。

Bradford實(shí)驗原理：考馬斯亮藍G250,在游離狀態(tài)下呈棕色，最大光吸收在488nm；當它與蛋白質(zhì)結合后變?yōu)?/span>藍色，蛋白質(zhì)—色素結合物在595nm波長(cháng)下有最大光吸收。其光吸收值與蛋白質(zhì)含量成正比，因此可用于蛋白質(zhì)的定量測定。蛋白質(zhì)與考馬斯亮藍結合在2min左右的時(shí)間內達到平衡，完成反應十分迅速；其結合物在室溫下1h內保持穩定。該法試劑配制簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便快捷，反應非常靈敏，靈敏度比Lowry法還高4倍，可測定微克級蛋白質(zhì)含量。

一、優(yōu)點(diǎn)

1. 靈敏度高，據估計比Lowry法約高四倍，其最低蛋白質(zhì)檢測量可達1ug。這是因為蛋白質(zhì)與染料結合后產(chǎn)生的顏色變化很大，蛋白質(zhì)-染料復合物有更高的消光系數，因而光吸收值隨蛋白質(zhì)濃度的變化比Lowry法要大的多。

2. 測定快速、簡(jiǎn)便，只需加一種試劑。完成一個(gè)樣品的測定，只需要5分鐘左右。由于染料與蛋白質(zhì)結合的過(guò)程，大約只要2分鐘即可完成，其顏色可以在1小時(shí)內保持穩定，且在5分鐘至20分鐘之間，顏色的穩定性最好。因而完全不用像Lowry法那樣費時(shí)和嚴格地控制時(shí)間。

3.干擾物質(zhì)少。如干擾Lowry法的K+，Na+，Mg2+離子，Tris緩沖液，糖和蔗糖，甘油，巰基乙醇，EDTA等均不干擾此測定法。

二、缺點(diǎn)

1. 由于各種蛋白質(zhì)中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此Bradford法用于不同蛋白質(zhì)測定時(shí)有較大的偏差，在制作標準曲線(xiàn)時(shí)通常選用g球蛋白為標準蛋白質(zhì)，以減少這方面的偏差。

2. 仍有一些物質(zhì)干擾此法的測定，主要的干擾物質(zhì)有:去污劑、Triton X-100、十二烷基硫酸鈉(SDS)和0.1N的NaOH。(如同0.1N的酸干擾Lowary法一樣)。

3. 標準曲線(xiàn)也有輕微的非線(xiàn)性，因而不能用Beer定律進(jìn)行計算，而只能用標準曲線(xiàn)來(lái)測定未知蛋白質(zhì)的濃度。

根據標準曲線(xiàn)，根據測出的未知樣品的A595值，即可查出未知樣品的蛋白質(zhì)含量。