ONPG是β-半乳糖苷酶的底物，形成鄰硝基苯酚。鄰硝基苯酚在堿性溶液中為黃色，可以在410-420 nm 波長(cháng)處測定含量。

在pH 10.2的條件下，摩爾消光系數為 2.13×104。我們已經(jīng)用該產(chǎn)品作為底物在410nm測定處的吸光率

檢測β-半乳糖苷酶的活性。

在 Tris緩沖液 ，pH 7.6, 20℃的條件下，β-半乳糖苷酶 (從大腸桿菌中獲得)的 Km 值為 9.5×10-4 M ，

在該底物條件下的最大反應速率為134 µmoles/min/mg 酶.該產(chǎn)品可以在水溶液中配制成3 mg/ml的濃度，

儲液也可以在磷酸緩沖液中配制。

當用作β-半乳糖苷酶的底物時(shí)，可在100 mM 鈉磷酸鹽緩沖液，pH 7.3，配制成濃度約為20.5 mg/ml的溶液，

可以輕微加熱使其完全溶解。

用于檢測β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)活性，是β-半乳糖苷酶的顯色底物。

經(jīng)β-半乳糖苷酶催化后可產(chǎn)生黃色產(chǎn)物，在410－420nm波長(cháng)可以檢測吸光度。

利用b-galactosidase活性與否可以來(lái)決定微生物是否可以發(fā)酵乳糖，

而b-galactosidase的活性則可利用o-nitrophynyl, b-D-galactopyranoside(ONPG)來(lái)測定，

如果有b-galactosidase存在的微生物則會(huì )使無(wú)色ONPG水解成黃色的o-nitrophynyl(ONP)，

因此水溶液會(huì )變成黃色。