DAPI，也稱(chēng)DAPI dihydrochloride，是一種常用的核酸染料，可以和雙鏈DNA富含AT序列的小溝結合，產(chǎn)生比自身強20多倍的藍色熒光。

和EB(ethidium bromide)相比，DAPI對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。DAPI也可對RNA進(jìn)行染色，染色機理是其可以選擇性嵌入“AU序列”并發(fā)出熒光。相比DAPI-dsDNA

(Ex/Em=358nm/461 nm)，

DAPI-RNA具有較長(cháng)的最大發(fā)射波長(cháng)(500 nm)，其熒光亮度僅有DAPI-dsDNA的20%。

盡管DAPI不能通過(guò)活細胞膜，但可以通過(guò)提高濃度使之進(jìn)入活細胞。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用來(lái)檢測酵母線(xiàn)粒體DNA，葉綠體DNA，病毒DNA，Microplasm DNA以及

染色體DNA。

DAPI典型的藍色熒光特性使其非常普遍的搭配其他綠色、黃色或紅色熒光染料用于細胞生物學(xué)多色熒光標記技術(shù)，因此也常作為核酸和染色體的復染劑用于細胞凋亡檢測、RNA原位雜     交、直接或間接免疫檢測等領(lǐng)域，其染色后可用熒光顯微鏡觀(guān)察或流式細胞儀檢測。

使用方法:

1. 配制工作液：

用雙蒸水或PBS稀釋母液，配制成所需要的工作的濃度（0.5-10 μg/mL）。

2. 固定的細胞或組織染色：

對于固定的細胞或組織樣品，固定后，適當洗滌去除固定劑。DAPI染色通常在其他染色的最后進(jìn)行。如果不需要進(jìn)行其它染色，則直接進(jìn)行DAPI 染色。

a) 對于貼壁細胞或組織切片：加入適量DAPI染色液，覆蓋住樣品即可。

b) 對于懸浮細胞：至少加入待測染色樣品體積3倍的染色液，混勻。室溫放置3-5分鐘。

c) 吸除DAPI染色液，用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次，每次3-5分鐘。

d) 直接在熒光顯微鏡下觀(guān)察或封片后熒光顯微鏡下觀(guān)察。激發(fā)波長(cháng)360 nm，發(fā)射波長(cháng)460 nm。

3. 活細胞或組織染色：

a) 細胞培養物中加入適量DAPI染色液，約1/10細胞培養基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對于六孔板一個(gè)孔需加入1 mL染色液，對于96孔板一個(gè)孔需加入100 μL染色液。 

b) 在37℃培養細胞 10～20 分鐘。

c) 用 PBS或合適的緩沖液洗細胞兩次。

d) 直接在熒光顯微鏡下觀(guān)察或封片后熒光顯微鏡下觀(guān)察。激發(fā)波長(cháng)360 nm，發(fā)射波長(cháng)460 nm。

DAPI，熒光顏色：藍色；染細胞類(lèi)型：活細胞和固定細胞；應用：

 （1）DAPI是一種常用的可以穿透細胞膜藍色熒光DNA染料，可對DNA 染色的細胞核染色試劑，其與DNA結合后可以產(chǎn)生比DAPI 自身強20多倍的熒光，而與單鏈DNA結合無(wú)熒光的增強。

（2）DAPI常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀(guān)察或流式細胞儀檢測。DAPI對雙鏈DNA的染色靈敏度要高于EB和PI,熒光強度比Hoechst低，但光穩定性高于Hoechst。

（3）DAPI能快速進(jìn)入活細胞中與DNA結合，因此DAPI對生物體而言，也被視為-種毒性物質(zhì)與致癌物。使用過(guò)程中應注意操作與拋棄的處理程序。

 使用PI單一染色觀(guān)測培養細胞，只能表示細胞的壞死情況，而不是凋亡（當然晚期凋亡PI亦可著(zhù)色）。

 但是如果我們只是想知道細胞的死亡情況，而不是仔細區分壞死或凋亡，那么PI單一染色即可以。但是如果我們一定要認定細胞的凋亡，那么PI單一染色顯然不夠！

 這個(gè)時(shí)候使用Abbkine的細胞狀態(tài)檢測系列產(chǎn)品，例如，TUNEL法細胞凋亡檢測試劑盒（細胞凋亡晚期），Annexin V/PI細胞凋亡檢測試劑盒和線(xiàn)粒體膜電位分析試劑盒（JC-1）

（細胞凋亡早期）以及Caspase系列活性分析試劑盒(比色法)（細胞凋亡中期）。