實(shí)驗步驟:
1) 用適當的限制性?xún)惹泻怂崦赶d體DNA和目的基因；
2) 按連接步驟連接目的基因和載體，并轉化到轉化DH5α感受態(tài)細胞中；
3) 分別挑取單菌落接種于5 mL LB ( 0.1 g·L-1 氨芐青霉素)中，37℃培養過(guò)夜；
4) 以2 %體積比轉接于2 ml LB( 0.1 g·L-1 氨芐青霉素)中，37℃繼續培養2.5 hr，至細菌對數生長(cháng)期
加0.1 mmol/L IPTG 2 µl誘導3-4 hr，同時(shí)設立不加IPTG誘導作為對照；
5) 取上述菌液1 mL，12000 rpm離心10min，收菌沉淀；
6) 重懸于冰的100 µl PBS中，加入PMSF至終濃度為10 mmol/L。震蕩器震蕩混勻，加入2×加樣緩沖液，
煮沸10 min變性，12,000 rpm離心10 min；
7) 分別取誘導前和誘導后的樣品10 µl進(jìn)行SDS-PAGE電泳分析。
（PS：如果表達載體的原核啟動(dòng)子為PL 啟動(dòng)子，則在30 -32 ℃培養數小時(shí)，使培養液的OD600達0.4-0.6，
迅速使溫度升至42 ℃ 繼續培養3 -5h ；
如果表達載體的原核啟動(dòng)子為tac 等，則37 ℃培養細菌數小時(shí)達到對數生長(cháng)期后
加IPTG 至終濃度為1 mmol / L，繼續培養3 -5h）
經(jīng)過(guò)實(shí)驗會(huì )發(fā)現，IPTG的濃度并不是越大越好。這是由于IPTG對菌體具有一定的毒性，超過(guò)濃度也會(huì )殺死細胞；
而且一般來(lái)講，我們希望細胞內表達的可溶性蛋白越多越好，但是很多時(shí)侯I(lǐng)PTG濃度太高會(huì )形成大量包涵體，而可溶性蛋白的量反而減少。
因此，最合適的IPTG濃度往往不是越大越好，反而濃度較低。
對基因工程菌株進(jìn)行誘導培養目的在于提高目的蛋白的產(chǎn)量，降低成本。
目的基因的表達量除受菌株自身因素和表達質(zhì)粒的影響外，還受其他外界條件，如誘導物濃度、誘導溫度和誘導時(shí)間等的影響。
所以一般情況下，一個(gè)未知的蛋白在表達純化之前，最好要對誘導時(shí)間，溫度以及IPTG濃度進(jìn)行研究，以便選擇合適的條件，獲得最好的實(shí)驗結果。
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