潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類(lèi)抗生素，
通過(guò)干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成，
從而殺死原核（如細菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳動(dòng)物真核細胞。
大腸桿菌（ Escherichia coli.）來(lái)源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），編碼潮霉素B磷酸轉移酶，
將潮霉素B轉化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物，從而起到解毒作用。
針對這一原理，潮霉素B是一種非常有用的選擇性標記，用來(lái)篩選和維持培養成功轉染潮霉素抗性基因的原核或者真核細胞。
另外，由于作用模式的差異，常與G418 (GeneticinTM)，Zeocin™ 和Blasticidin S聯(lián)合使用進(jìn)行雙抗性陽(yáng)性細胞株的選擇。
潮霉素B還能用作抗病毒劑，因其選擇性滲透進(jìn)入因病毒感染增強通透性的細胞，且具有抑制翻譯的功效。
還可混合入動(dòng)物飼料中起到驅蟲(chóng)功能。
本品是無(wú)菌的潮霉素B溶液（100mg/mL in PBS buffer），可直接用培養液稀釋使用。
1. 常用篩選濃度
潮霉素B用來(lái)篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類(lèi)型，培養基，生長(cháng)條件和細胞代謝率而變化，
推薦使用濃度為50-1000 μg/mL。對于第一次使用的實(shí)驗體系建議通過(guò)建立殺滅曲線(xiàn)（kill curve）
即劑量反應性曲線(xiàn)，來(lái)確定*篩選濃度。
一般而言，哺乳動(dòng)物細胞50-500 μg/mL；細菌/植物細胞20-200 μg/mL；真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線(xiàn)的建立
【注意事項】：
為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素*濃度，
可通過(guò)建立殺滅曲線(xiàn)（劑量反應曲線(xiàn)）來(lái)實(shí)現，至少選擇5個(gè)濃度。
1）第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上，37℃，CO2培養過(guò)夜。
【注】：對于需要更高密度來(lái)檢測活力的細胞，可增加接種量。
2）根據細胞類(lèi)型，設定合適范圍內的濃度梯度。
以哺乳動(dòng)物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000 μg/mL。
先用去離子水或者PBS buffer按照比例將母液稀釋?zhuān)缓笙♂尩较鄳獫舛鹊墓ぷ饕骸?/span>
3）第二天：替換舊的培養基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4）接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養基。
5）按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細胞計數來(lái)確定阻止未轉染細胞生長(cháng)的恰當濃度。
選擇在理想的天數（通常是7-10天）內能夠殺死絕大多數細胞的*濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩定轉染細胞的篩選
1）轉染48 h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來(lái)傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。
【注】：細胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷效果*。則當細胞過(guò)于稠密，其效率會(huì )降低。
為了得到較好的篩選效果，*將細胞稀釋至豐度不超過(guò)25%。
2）每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。
3）篩選7天后觀(guān)察并評估細胞*（集落）的形成情況。
集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細胞類(lèi)型，轉染，以及篩選效果。
4）挑取并轉移5-10個(gè)抗性*于35 mm細胞培養板，繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。
5）之后更換正常培養基培養即可。
抗生素一般是指抵抗微生物的藥物，以其功效作用分類(lèi)，有抑制細菌生長(cháng)及剎滅細菌的抗生素，但一般以其化學(xué)結構分類(lèi)
大致上分類(lèi)如下：
青霉素類(lèi)
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Amoxicillin（阿莫西林）
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Ampicillin sodium（安比西林鈉）
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Apalcillin（阿帕西林）
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Azlocillin（阿洛西林）
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Benzathine Benzylpenicillin（長(cháng)效青霉素，比西林）
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Benzylpanicillin potassium（青霉素，青霉素鉀）
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Carbeicillin sodium（卡比西林）
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Cloxacillin sodium（氯唑西林鈉）
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Dicloxacillin sodium（雙氯西林鈉）
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Furbenicillin
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Mecillinam， Amidinocillin（美西林）
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Methicilline sodium（甲氧西林，甲氧苯青霉素）
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Mezlocillin（美洛西林）
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Oxacillin sodium（苯唑西林鈉，新青霉素II）
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Penicillin G sodium， Benzylpanicillin sodium（青霉素，盤(pán)尼西林）
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Penicillin V（青霉素V）
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Piperacillin sodium
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Procaine benzylpenicillin（普魯卡因青霉素）
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Sulbenicillin sodium, Kedacillin
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Temocillin（替莫西林）
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Ticarcillin disodium（替卡西林鈉）
頭孢菌素類(lèi)
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Aztreonam（氨曲南）
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Cefacetrile sodium（頭孢賽曲）
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Cefaclor（頭孢克羅）
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Cefadine（頭孢拉定）
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Cefadroxil（頭孢羥氨芐）
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Cefalexin（苯甘頭孢菌素）
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Cefamandole（頭孢孟多）
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Cefapirin（頭孢匹林）
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Cefatrizine（頭孢曲秦）
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Cefathiamidine（頭孢硫月米）
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Cefazolin sodium（頭孢唑林鈉）
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Cefdinir（頭孢地尼）
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Cefmenoxime
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Cefmetazole（頭孢美唑）
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Cefminox（頭孢米諾）
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Cefodizime（頭孢地秦）
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Cefoperazone
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Cefotaxime
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Cefotetan（頭孢替坦）
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Cefotiam（頭孢替安）
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Cefoxitin（頭孢西?。?/span>
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Cefpirome（頭孢匹羅）
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Cefpodoxime proxetil
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Cefsulodin
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Ceftazidime（頭孢塔齊定）
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Cefteram（頭孢特侖）
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Ceftibuten（頭孢布烯）
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Ceftizoxime
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Ceftriaxone（頭孢曲松）
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Cefuroxime
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Cefuroximeaxetil
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Cefuzonam（頭孢唑南）
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Cephaloridine（頭孢利素I）
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Cephalothin sodium（頭孢菌素I）
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Clavulanic acid（克拉維酸）
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Flomoxef（氟氧頭孢）
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Imipenem（亞胺培南）
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Latamoxef sodium（拉氧頭孢）
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Sulbactam（舒巴坦）
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Thienamycin（硫霉素）
磷霉素類(lèi)
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Fosfomycin，Fosmicin（磷霉素，福賜美仙）
萬(wàn)古霉素類(lèi)
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Norvancomycin（去甲萬(wàn)古霉素）
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Vancomycin hydrochloride（鹽酸萬(wàn)古霉素）
利福霉素類(lèi)
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Rifampin（利福平）
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Rifamycin SV（利福霉素SV）
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Rifandin（利福定）
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Rifapentine（利福噴?。?/span>
多粘菌素類(lèi)
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Polymyxin B（多粘菌素B）
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Polymyxin E sulfate（硫酸多粘菌素E）
氨基糖類(lèi)
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Amikacin sulfate（硫酸阿米卡星）
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Astramicin A， Astromycine， Fortimicin A（阿司米星）
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Dibekacin（地貝卡星）
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Gentamycin sulfate（硫酸慶大霉素）
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Isepamicin（異帕米星）
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Kanamycin sulfate（硫酸卡那霉素）
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Micronomicin（小諾米星）
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Neomycin sulfate（硫酸新霉素）
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Ribostamycin（核糖霉素）
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Sisomicin（西索米星）
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Spectinomycin hydrochloride， Trobicin（鹽酸大觀(guān)霉素）
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Streptomycin sulfate（硫酸鏈霉素）
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Tobramycin（妥布霉素）
四環(huán)素類(lèi)
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Chlortetracyclin hydrochloride（鹽酸金霉素）
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Doxycycline hydrochloride（鹽酸多西環(huán)素）
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Metacycline hydrochloride（鹽酸美他環(huán)素）
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Minocycline（米諾環(huán)素）
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Oxytetracycline hydrochloride（鹽酸土霉素）
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Tetracycline hydrochloride（鹽酸四環(huán)素）
大環(huán)內酯類(lèi)
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Azithromycin（阿奇霉素）
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Clarithromycin（克拉霉素）
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Dirithromycin（地紅霉素）
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Erythromycin（紅霉素）
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Erythromycin estolate（依托紅霉素）
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Josamycin（交沙霉素）
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Kitasamycin， Leucomycin（吉他霉素）
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Meleumycin（麥白霉素）
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Medecamycin（麥迪霉素）
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Medecamycin acetate（醋酸麥迪霉素）
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Rokitamycin（羅他霉素）
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Roxithromycin（羅紅霉素）
氯胺苯醇類(lèi)
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Chloramphenicol（氯霉素）
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Chloramphenicol palmitate（氯霉素棕櫚酸酯）
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Thiamphenicol（硫霉素）
林可霉素類(lèi)
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Clindamycin hydrochloride（鹽酸克林霉素）
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Lincomycin hydrochloride（鹽酸林可霉素）
作用機制：
潮霉素B是由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類(lèi)抗生素，通過(guò)抑制蛋白質(zhì)合成而殺死細菌、真菌和高等真核細胞。
潮霉素B通過(guò)干擾70S核糖體易位和誘導對mRNA模板的錯讀而抑制蛋白合成。目前常用于篩選和維持培養含潮霉素抗性基因的原核或真核細胞。
抗性基因：
對潮霉素B的抗性源自編碼潮霉素B磷酸轉移酶（Hph）的基因。至今發(fā)現兩種來(lái)源：
? Streptomyces hygroscopicus產(chǎn)生的Hph抗性基因；
? Escherichia coli，Klebsiella pneumoniae內質(zhì)粒攜帶的Hph抗性基因（常用）
生物應用：
1）篩選和維持培養穩定轉染Hph+載體的原核細胞或真核細胞（植物細胞和哺乳動(dòng)物細胞）；
2）由于作用模式的差異，常與G418 (GeneticinTM)，Zeocin™ 和blasticidin S聯(lián)合使用，篩選穩定轉染兩個(gè)不同載體的細胞株；
3）抗病毒劑，由于潮霉素B選擇性滲透進(jìn)入因病毒感染增強通透性的細胞，而且具有抑制翻譯的功效；
4）作為驅蟲(chóng)藥加入動(dòng)物飼料；
應用濃度：
潮霉素B用來(lái)篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類(lèi)型，培養基，生長(cháng)條件和細胞代謝率而變化。推薦使用濃度為50-1000 μg/mL，最佳濃度需要殺滅曲線(xiàn)來(lái)確定。
哺乳動(dòng)物細胞·200-500 μg/mL；細菌/植物細胞·100-300 μg/mL；真菌·300-1000 μg/mL；
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