在細胞培養體系中,血清是唯一不屬于人工合成的成分,同時(shí)也讓血清成分成為細胞培養體系中最大的不確定因素,因此如何選擇合適的血清是細胞培養得好壞的決定性因素之一。根據采血時(shí)機的不同,牛血清可分為胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)、新生牛血清和小牛血清,我們細胞培養中一般使用的是胎牛血清,也是最為(干凈),營(yíng)養最為豐富的血清。
胎牛血清是在母牛懷孕3-8個(gè)月時(shí),通過(guò)胎牛心臟穿刺采血獲得新鮮的胎牛全血,經(jīng)自然層析、離心后收集得到去除血細胞、纖維蛋白等成分的淡黃色透明上清液體,并在生產(chǎn)過(guò)程使用多級高置流膜過(guò)濾技術(shù)和三級0.1µm終端微濾方法處理而獲取的血清。相比于新生牛和小牛血清,胎牛血清中所含的抗體、補體等對細胞有傷害的成分最少,因此對于一些較“脆弱”的細胞如干細胞、原代細胞,一定要使用優(yōu)質(zhì)的胎牛血清進(jìn)行培養。
MDBio公司旗下在美國創(chuàng )建品牌ACTGene胎牛血清,每一批原材料都經(jīng)過(guò)嚴格篩選,所有產(chǎn)品均在經(jīng)歐洲藥品質(zhì)量管理局(EDQM)認證的GMP車(chē)間生產(chǎn),其生產(chǎn)采用三步濾菌處理法,最后的過(guò)濾步驟為連續通過(guò)三個(gè)100nm的過(guò)濾膜,并經(jīng)過(guò)嚴格的病原性病毒檢測,無(wú)病原性病毒(BVDV,IBRV,BPIV3);
胎牛血清要求:
1、性狀、外觀(guān):淺黃色澄清、無(wú)溶血、無(wú)異物稍粘稠液體。
2、蛋白質(zhì)含量:3.5%~5.0%( w/v)
3、血紅蛋白含量:≤ 0.02%( w/v)
4、無(wú)菌檢驗:陰性
5、支原體檢驗:陰性
6、細菌內毒素:≤5(EU/ml)
7、牛腹瀉病毒:陰性
8、大腸桿菌噬菌體:陰性
9、支持細胞增殖:(Sp2/0-Ag14) 生長(cháng)曲線(xiàn) (接種濃度)最大增殖濃度 ≥2.5×106個(gè)/ml,細胞倍增時(shí)間:≤15h,克隆率:≥85%
1、提供對維持細胞指數生長(cháng)的激素,基礎培養基中沒(méi)有或量很少的營(yíng)養物,以及主要的低分子營(yíng)養物;
2、提供結合蛋白,能識別維生素、脂類(lèi)、金屬和其他激素等,能結合或調變它們所結合的物質(zhì)活力;
3、有些情況下結合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結合,起到解毒作用;
4、是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質(zhì)上所需因子來(lái)源;
5、起酸堿度緩沖液作用。 6、提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害;
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