將PCR產(chǎn)物快速、定向、有效的克隆到任何目標載體而設計,有效避免了在克隆過(guò)程中遇到的合適內切酶的選擇、磷酸化、補平、加A、使用中間載體的復雜步驟。無(wú)須連接酶,只需要把目標載體線(xiàn)性化(平末端,黏性末端都可以) ,PCR產(chǎn)物無(wú)須任何酶促處理,直接和目標載體混合,20-30分鐘一站是解決問(wèn)題
原理:
根據酶切后線(xiàn)性化載體的兩端序列,分別在目的基因兩端設計15base與載體末端同源的序列,PCR擴增產(chǎn)物二端就會(huì )分別帶有15bp和線(xiàn)性化載體兩端相同序列,PCR產(chǎn)物和線(xiàn)性化載體與同源重組酶充分混勻,22度C溫浴30分鐘后,按傳統方法轉化大腸桿菌就可以高效、定向將PCR產(chǎn)物克隆到目標載體上。
無(wú)需藍白班篩選
無(wú)需擔心克隆方向
無(wú)須擔心陽(yáng)性克隆比率
隨意挑取克隆陽(yáng)性率>99%
PCR產(chǎn)物快速、定向、有效的克隆到任何目標載體
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