細胞轉染是細胞生物學(xué)和分子生物學(xué)的一種常用的技術(shù)手段。而轉染效率低下卻是實(shí)驗人員經(jīng)常遇到的問(wèn)題，尤其是原代細胞轉染，轉染難度更大?，F分享幾個(gè)細胞轉染實(shí)驗中易出現的問(wèn)題，望實(shí)驗人員能夠注意。
1.準備不足:
做細胞轉染的時(shí)候，在開(kāi)展正式實(shí)驗前要多做預試驗，優(yōu)化轉染條件。優(yōu)化轉染條件包括：轉染試劑的用量、DNA密度、細胞密度、試劑和DNA混合孵育時(shí)間等等。
2.細胞污染:
細胞污染也是造成細胞死亡，轉染效率低下的一大原因。首先，轉染細胞用的質(zhì)粒必須保證無(wú)菌。而現在市場(chǎng)上的一般的質(zhì)粒提取試劑盒都做不到絕對無(wú)菌。分享一個(gè)小秘訣：將提完質(zhì)粒后或者提的最后一步，用75％乙醇沉淀，這樣就除菌了。
3.質(zhì)粒質(zhì)量問(wèn)題:
轉染用的質(zhì)粒首先要保證數量，一般為2μg以上。質(zhì)粒純度不夠或者含有細菌LPS或其他對細胞有毒害作用的物質(zhì)，也會(huì )影響轉染效率。這個(gè)時(shí)候，就應該對質(zhì)粒進(jìn)行純化和濃縮。
4.細胞狀態(tài)不好:
細胞狀態(tài)不好，會(huì )導致轉染效率低下。一般進(jìn)行轉染的細胞應該處于對數生長(cháng)期。如果是貼壁細胞的話(huà)，貼壁率應該在70-80%；如果是懸浮細胞的話(huà)，應該是6×105個(gè)/孔（24孔板），一般是轉染前一天換液，轉染前用無(wú)血清培養基或PBS洗細胞一次。
5.轉染試劑問(wèn)題:
脂質(zhì)體試劑毒性較大，易造成細胞死亡和轉染效率下降。