內參也叫看家基因,在組織或細胞中都會(huì )表達,且表達量在不同組織或細胞中幾乎是相同的,一般有α-Tublin ,β-actin ,GAPDH 等,在Western Blotting 中使用內參其實(shí)就是在WB 過(guò)程中的另外用內參對應的抗體檢測內參。其作用有二:
1.是看提取蛋白質(zhì)量的好壞。如果做western 的時(shí)候,內參照蛋白有條帶,而目的蛋白沒(méi)有,說(shuō)明蛋白的提取和轉膜等步驟沒(méi)有問(wèn)題,是目的蛋白的抗體質(zhì)量不好或者是稀釋倍數不對。
2.是比較客觀(guān)的說(shuō)明目的蛋白的表達情況,消除上樣量等的誤差。不同的樣品之間由于蛋白提取的量有差別,可能強陽(yáng)性的表達跑出來(lái)的帶很弱。因此設立內參照,比較不同樣品之間的表達情況。
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